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轻松辨别细胞状态的尊龙凯时方法

发布时间:2025-07-29   信息来源:尊龙凯时官方编辑

掌握以下方法,您可以轻松判断细胞的状态:

轻松辨别细胞状态的尊龙凯时方法

微观观察法

在显微镜下观察活细胞时,您会发现其通常具有透亮的外观、完整的细胞膜,以及清晰可见的细胞核和细胞质内的细胞器。对于贴壁细胞而言,活细胞能够牢固地附着在培养皿或培养瓶上。相反,死细胞则呈现暗淡无光,细胞膜可能出现破裂,并无法有效附着(尤其是贴壁细胞)。悬浮细胞的死细胞则可能表现出细胞膜破裂及内容物外泄等现象。

细胞生长形态

不同类型的细胞具有特定的生长形态。例如,成纤维细胞呈细长形状并附着在基质上生长,而上皮细胞则呈现多边形。观察细胞是否保持其特有的生长形态,也是判断细胞状态的重要依据。

台盼蓝染色法

台盼蓝是一种仅对死细胞有效的染料,活细胞因细胞膜完整而无法吸收此染料,因此不会被染色;死细胞则由于细胞膜的通透性增加,能够被台盼蓝染成蓝色。操作时,将细胞与台盼蓝溶液混合后,通过显微镜观察染色情况。注意染色时间一般不应超过3分钟,以避免活细胞因长时间接触染料而被误染。此外,其他染色方法如伊红-美蓝染色、中性红染色也常用于细胞活性的检测,但具体选择需根据实验需求和细胞类型来决定。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞消化情况。如果大部分细胞变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲培养瓶后加5ml以上的完全培养基以终止消化。 3. 轻轻吹打细胞,直至完全脱落后吸出,将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清,补加1-2ml完全培养基重悬。 4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 半换液法:将培养瓶竖着放置在培养箱中静置约1小时,吸掉约3ml培养基,补给3ml完全培养基。如果培养基变色慢,可直接加入约500μl的FBS。传代时可直接补给5ml培养基,分为两个培养瓶培养,通常这样传代约3次后可以进行一次离心传代,以去除死细胞。 2. 离心换液法:如需分瓶,先将细胞悬液收集至离心管中,1000RPM离心5分钟,弃去上清,再补加1-2ml培养液后重悬混匀。随后,将细胞悬液按1:2的比例分到新的T25瓶中,并添加6-8ml依据说明书配置的新完全培养基,以保持细胞的生长活力,后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%的面积时,弃去T25培养瓶中的培养液,并用PBS清洗细胞一次。 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,观察细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化,轻轻吹打使细胞脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000RPM离心5分钟; 3. 弃去上清,向沉淀细胞中加入1ml的无血清冻存液(尊龙凯时生物产品),混匀后转入冻存管中。 4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱,若后续需将细胞转入液氮罐中,则需先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管(注意防护),迅速置于37℃水浴中解冻,直至无结晶后,用75%的酒精擦拭冻存管外壁。 2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000RPM离心5分钟; 3. 弃去上清,用5ml完全培养基重悬细胞,接种至T25培养瓶,并放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养; 4. 第二天,换用新鲜的完全培养基继续观察和培养。

以上方法结合尊龙凯时的高品质生物产品,将有助于提高您在细胞培养过程中的效率与准确性,实现更优质的科研成果。