尊龙凯时人小细胞肺癌细胞DMS114培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基+10%胎牛血清(FBS)+1%青霉素/链霉素(P/S)

传代方法：建议第一次传代比例为1:2。请在每两天更换培养液。对于对比培养，如果效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞到货处理

在细胞状态良好后，使用完全培养液灌满细胞瓶并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。请用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好包括40x、100x和200x的照片）。前三天的照片是售后服务的重要依据。若不提供照片，则默认收到的状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未达80%汇合度，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5%CO2的培养箱中培养。若细胞密度超过80%，请按以下步骤进行传代：
1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟。显微镜下观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并开始脱落，轻敲培养瓶，迅速加5ml以上的完全培养基以终止消化；
3. 轻轻吹打细胞使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬；
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（分为两个T25瓶），添加新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞；
2. 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，并在显微镜下观察。当细胞开始回缩变圆时，加入5ml完全培养基终止消化；
3. 将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清；
4. 将细胞沉淀加入1ml尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。然后将冻存管直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，请确保在-80℃冰箱中至少存放24小时后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护设备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2细胞培养箱中；
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞的附着力较弱，在运输过程中可能发生脱落，这是正常现象。若脱落较多，请将培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，保留上清作过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基以终止消化。然后再离心，弃上清，重悬于1-2ml完全培养基中。之后按1:2比例进行传代，添加新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题时的重发情况：
- 运输途中发生的细胞丢失、瓶身破损或培养液严重泄露等，提供相应证明可重发；
- 细胞污染需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
- 若常温发货的细胞静置24小时或干冰发货的细胞复苏后24小时内多数细胞未存活，需提供细胞状态照片以申请重发；
- 干冰发货细胞复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时且未开封发生污染，提供证明可重发；
- 细胞活性问题请在收到产品7天内，使用台盼蓝染色法检测细胞活力并提供真实结果。
- 收到细胞当天及第2、3天内拍照，若超过3天未告知视为产品合格，如4-7天内出现问题需提供前3天照片、问题状态照片及操作详细步骤，与技术人员沟通判定责任后可重发。

2）细胞出现问题时不予重发的情况：
- 客户造成的细胞污染，不重发；
- 客户错误操作导致细胞状态不佳，不重发；
- 使用非推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不重发；
- 细胞状态不佳未提供前3天照片，不重发；
- 细胞在培养过程中经过其它处理的，不重发；
- 收到细胞后2天内未告知的，不重发；
- 其他情况需视具体情况而定。