胎牛血清的常规储存温度为-20℃，而对于长期保存，建议使用-80℃的环境。解冻时不建议直接将其放置于常温（25-37℃），因为此方式容易导致絮状沉淀的产生，从而可能影响血清的质量。推荐的解冻方法是将血清先从-20/-80℃转移至4℃进行解冻，待完全成为液体后再转移到室温。在解冻过程中，需不时轻摇，确保血清内成分和温度均匀混合，能够有效减少沉淀的形成。

解冻后，建议将血清分装至15mL或50mL的无菌离心管进行冻存。可以根据自己使用血清的频率，选择在4℃存放已解冻分装的血清，以方便频繁配制培养基。但需注意，在4℃也不宜存放过久，最好在一个月内使用完毕。解冻后的胎牛血清不应在37℃或室温下存放太长时间，以免重要的细胞生长因子失活，影响细胞的健康状态。

在使用胎牛血清时，添加量也应谨慎，一般建议为5%、10%或20%。大多数细胞在正常培养时使用10%的血清浓度，而部分原代细胞提取时可使用20%血清。具体使用何种血清浓度，需根据细胞特性和实验目的进行摸索。

另外，有关热灭活的处理，通常是在56℃下处理已解冻的血清，持续30分钟。此加热步骤有助于去活化补体，而补体参与的反应包括：溶细胞活性、平滑肌收缩、肥大细胞和血小板释放组胺、增强吞噬作用，以及淋巴细胞和巨噬细胞的趋化和激活。对于常规细胞培养而言，热灭活并非必要步骤，因为经过处理的血清对细胞生长的作用非常有限，甚至可能因高温处理影响血清质量，导致细胞生长速率降低以及沉淀物增多等负面效果。

在细胞培养过程中，研究者经常需要更换血清。如果直接用新的血清配制培养基，可能会发现原本生长迅速的细胞突然增殖缓慢，甚至死亡。这通常是因为细胞在以前的培养环境下得到了驯化，突然更换营养环境，即便是质量更高的血清，也可能导致细胞适应不良。因此，更换血清时建议遵循梯度更换的原则，以保证细胞能够顺利适应。首次更换时，推荐用原培养体系进行细胞复苏，待细胞状态恢复之后再进行培养。在测试时，避免直接用100%新血清替换，应按照比例梯度进行替换。例如，第一次更换可以按照新旧体系1:3的比例，第二次换液为1:1，第三次为3:1，最后再进行完全替换。对于一些对培养体系较为敏感的细胞，替换比例需要更为细化。

解冻后如发现有少量乳白色絮状或点状物质，这主要为血清中脂蛋白变性及解冻后的纤维蛋白所致，这些絮状物质不会影响血清质量，可通过400×g离心5分钟取上清，基本不会对细胞造成影响。一般情况下，厂家提供的血清为无菌，不需要再次过滤。如果发现有悬浮物，可以将血清与培养液一起过滤，但切勿直接过滤血清。

在细胞培养中，如发现黑点的生成，首先应检查培养基是否浑浊，黑点是否随意游动。如果是由于污染（如细菌或支原体污染）所致，培养基会迅速变色、变混浊。若在显微镜下观察细胞状态正常，黑点的出现可能来自以下几种情况：(1) 细胞在生长过程中自然破裂后留下的残骸；(2) 血清中存在杂蛋白，可能因反复冻融所致；(3) 配制培养基的水质或容器不合格。可采用离心或过滤的方法去除这些黑点。对于原代细胞中的小黑点，可能是原代组织中的杂质，经过多次传代可加以消除。

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