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尊龙凯时的单、多克隆抗体及抗原选择方法

发布时间:2025-03-16   信息来源:尊龙凯时官方编辑

尊龙凯时的多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb)是通过免疫动物用含有多种抗原决定簇的抗原,从而激发多个B细胞克隆的产生,这些克隆能够生成针对不同抗原表位的多种抗体。因此,得到的免疫血清实际上是一种抗体混合物,即多克隆抗体。相比之下,单克隆抗体则是由单一B细胞克隆生成,具有高度的均一性,仅针对特定的抗原表位。通常采用杂交瘤技术来制作单克隆抗体,在这种技术中,具有特定抗体分泌能力的致敏B细胞与具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合,形成B细胞杂交瘤。

尊龙凯时的单、多克隆抗体及抗原选择方法

单多抗的优缺点

多克隆抗体的优点

多克隆抗体具备以下优点:

  1. 能够增强低表达水平目标蛋白的信号。
  2. 识别多个表位,适应性强。
  3. 相比单克隆抗体,容忍抗原中的微小变动。
  4. 能够识别与免疫原蛋白质高同源性的蛋白,或从非免疫原物种组织样本中筛选目标蛋白。
  5. 通常是检测变性蛋白质的首选。
  6. 多表位一般可提供更强的检测能力。

多克隆抗体的缺点

多克隆抗体的缺点包括:

  1. 容易出现批次间的差异。
  2. 可能产生大量非特异性抗体,进而在某些应用中引发背景信号。
  3. 不适合检测抗原的特定结构域,因为抗血清通常能够识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

单克隆抗体的优点如下:

  1. 一旦制备成功,成为一个恒定的再生源,所有批次均相同。
  2. 切片和细胞染色产生的背景较低。
  3. 具有高特异性,适合用作分析测定中的一抗或检测组织中的抗原,背景染色显著低。
  4. 同质性非常高。
  5. 特异性使单克隆抗体能够高效绑定混合物中的抗原。

单克隆抗体的缺点

单克隆抗体的缺点包括:

  1. 虽然可产生大量特异性抗体,但拥有过强的特异性。
  2. 相比多克隆抗体,经过化学处理后更容易丢失抗原表位;可通过使用同一抗原的多个单克隆抗体进行补偿。

选择单抗和多抗的原则

在对抗体特异性要求较高、用量较大或需要长期稳定应用的情况下(例如WB/IP/IF/ICC等),建议选择制备单克隆抗体。由于多克隆抗体特异性较差,不同批次间会存在差异,因此在特异性和一致性方面限制较大,容易导致检测结果的背景。此外,多克隆抗体需要较大数量的免疫原,若免疫原制备艰难,建议选择单克隆抗体。

如果对抗体特异性要求不高,且实验需进行沉淀和凝集检测或仅需做ELISA,可以考虑多克隆抗体。多克隆抗体在制备时间短、首次制备成本低等方面相较单克隆抗体具备优势,且可提高检测灵敏度,对于低丰度蛋白也更易检测。

抗原的选择

抗原可选择天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白和多肽,选择高质量抗原有助于获取高质量抗体。目前,重组蛋白或多肽常用于抗体制备。

一般而言,重组蛋白作为抗原往往含有更多的抗原决定簇,既有空间表位,也会有线性序列表位,更能够有效激发机体的免疫反应,从而提高获取广泛应用抗体的几率。尤其是在目的蛋白具有修饰或复杂结构的情况下,重组蛋白通常是优先选择。

当然,有些情况下必须使用多肽,例如制备对某个同源蛋白的抗体时,需确保找到具有特异性的aa合成多肽。抗原多肽的选择遵循以下原则:

  1. 尽可能位于蛋白表面。
  2. 确保该序列不形成α-helix。
  3. N端和C端的肽段优于中间肽段。
  4. 避免蛋白内部重复或接近重复的序列。
  5. 避免同源性过强的肽段。
  6. 交联可在N端或C端进行,应选择对于产生抗体影响较小的端。
  7. 序列中避免过多的脯氨酸,但一两个脯氨酸有助于稳定肽链结构,提高特异性抗体的产生。

尊龙凯时致力于提供高质量的抗体研发解决方案,确保科研工作者在生命科学领域取得更好的成果。