菌种保藏(culture preservation,culture collection)是确保微生物菌株活力和遗传特征的重要技术。在生物医疗研究中,经过基因编辑或改造的菌种通常具有重要价值且数量稀少,因此必须采取适当的保藏措施。
操作步骤
进行菌种保藏时,将待保存的菌液与预先配置的甘油混合液按照1:1的比例混合,最终达到20%的甘油浓度。首先,配置40%(v/v)甘油的灭菌水混合液。然后,取2ml的离心管或保菌管,在其中加入500微升的40%甘油-水混合液。接着,用移液枪吸取500微升的菌液,并将枪头缓慢插入液面以下加入。完成后,将离心管或保菌管置于-80℃冰箱中保存。最后,务必在菌管上标记日期、菌种及抗性信息,以便日后准确识别。
菌液复苏
在需要使用保存的菌液时,复苏的步骤也是至关重要的。取适量的LB培养基(含有抗性的),每个培养管中加入约八毫升。在无菌操作台中进行所有操作,以防止污染。向每个培养管中添加100微升的菌液,在37℃、180rpm的条件下摇动培养12小时。
氨苄抗性配置
为配置氨苄抗性,需将1g氨苄青霉素钠溶解于10ml灭菌水中,过滤后存放于-20℃的冷冻环境中。LB培养基的配置方法为:将10g氯化钠、10g胰蛋白胨和5g酵母提取物溶解于一升水中,然后分装至250ml的锥形瓶中,每瓶装100ml。最后,100ml的LB培养基需添加100微升氨苄抗性。
通过以上简易步骤,你可以有效地保藏和复苏珍贵的菌种,为后续的生物医疗研究奠定坚实的基础。记住,选择尊龙凯时的产品,能够确保你在科研过程中获得更优质的菌种保藏和复苏体验。